我玩mRNA的经历

吃与活
楼主 (文学峸)

mRNA, 中文称信使核糖核酸,是细胞内合成蛋白质的模板。

mRNA极其容易降解。我们在提取RNA的时候要戴口罩,戴手套,用无RNA酶的器具,操作时不能用手接触头发,脸,如果忘了手套上就可能接触RNA酶。因为RNA酶在自然界到处都是,而且稳定,手上,头发上,口水里都有,要做到不污染RNA酶还是要费些力气的。保持提纯的mRNA要放在低温,短期负20度,长期保存要负80度。这大概就是美国的两种mRNA疫苗要低温保存的原因之一吧。

 

除了从动物组织中提取mRNA, 我们也制造mRNA。我们是先制造一个编码一个蛋白的DNA,然后在编码区的下游加上一段序列,然后加三十多个腺苷酸"尾巴",使mRNA在细胞中保持稳定。我们用反转录酶以线状DNA为模板合成mRNA,然后在mRNA的头部加上有"帽子",有"帽"有"尾",mRNA才稳定并能在细胞中指导蛋白质的翻译。我们一般是把合成的mRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞中表达所要的蛋白质进行研究。

我靠这这些技术发现了一个重要基因/蛋白,但从来没有想到用类似的手段来生产抗体。所以得知美国在生产mRNA新冠疫苗时,对他们在几个星期内就完成设计生产并不意外,因为我知道从mRNA入手比从蛋白或灭活病毒入手要快得多,且安全得多,方便得多。

但是,到底疫苗有效果呢,这谁也不知道,直到临床试验出来结果才知道。但这种技术快是肯定的,将来肯定会大有应用前途,比如针对癌症病人特殊突变定制抗癌疫苗等。

尽管采取了一些措施,mRNA注射到体内是不稳定的,生产蛋白的时间很短。至于mRNA能不能整合到染色体上,改变基因什么的,那都是意想,在专业人员眼里不值一提。

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julie116
癌症病人早尝试过了。估计效果不佳。否则早宣布攻克癌症了
业余城管
看来吃兄真的被RNA玩过,对RNA的易降解印象深刻。
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viewfinder
如果转录成DNA,会不会稳定一些呢?
吃与活
DNA稳定,但需要打到细胞核里才能转录,然后才能合成蛋白。对生产疫苗而言,让DNA入核技术上做不到

我们做过把DNA打到爪蟾卵母细胞的核中,是能得到表达。但速度慢,成功率低,在我们这个领域,与注射RNA进细胞质相比,采用DNA注射入核的人很少。

吃与活
我对提纯mRNA是有些忌惮的,做砸过。多数时候我玩RNA,少数时候RNA玩我。
吃与活
给个文献链接呗
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julie116
你业内人士应该有更好渠道拿数据
苦人不哭
请解释印度DNA疫苗是怎么回事

报道说有效性67%,常温保存,生产技术简单,不用注射,只需如水痘一样划伤滴滴就行了

吃与活
我不了解印度疫苗,也不想在这上面花时间。
吃与活
我问你的意思就是,知之为知之,不知为不知,不要没根据地发表看似有根据的言论。
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xinxin76
DNA用电脉冲法导入,效果大增
三丝
楼主大概是90年代作的mRNA 工作吧,年代久远
三丝
很好奇如何“用反转录酶以线状DNA为模板合成mRNA” 是吗?那真是个重大发明
三丝
诺奖级的工作鸭,埋木了
三丝
我只知道逆转录酶是RNA为模板合成DNA
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honeydue
多谢这位专业的帖子。我们知道疫苗是临时抱佛脚,可是看了半天,也没有看出来,疫苗到底有没有用。
三丝
与你共勉 知之为知之,不知为不知,不要没根据地发表看似有根据的言论
F
FollowNature
现在不是测出抗体了吗? 就是有用吧
三丝
多种DNA疫苗早已用在兽用疫苗上。
d
dudaan
臆想
吃与活
专等杜编指正

等有时间再改。我的容错能力较强:)

吃与活
不懂不要随便发言为好。
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julie116
你如果连这个都不知道很疑惑你专业领域到底是什么
三丝
这位有些mRNA的工作经验,但对于mRNA vaccine 可以说10窍通了9窍
三丝
大概是学的是马克思哲学
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julie116
集权政治学?给吃教授推荐一个需要花钱的论文。其实也有很多不要花钱的。

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1748013219301483

 

吃与活
你是对的,是RNA聚合酶,不是反转录酶
t
tryyyyyy
癌症免疫不是仅仅产生抗体这么简单。
周老大
所以病毒基因是有可能进入染色体的,对吗?楼主好象认为绝无可能。
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pickshell
没看懂。特指癌症免疫疗法,还是癌症疫苗?

你的知识和信息不知来自何处?语言表达和逻辑总是很奇怪。

s
street0120003
谢谢吃与活的介绍,能否悄悄话告诉

我你发现的哪个基因/蛋白,相信你的专业造诣颇深。2年前得知某校友发现某乳癌基因,我出于好奇硬是读了他的几篇论文..

锅沿
我还在想,你可能把酶的名字写错了。
锅沿
应该有这种可能,什么事情没有绝对,机率不知道多少。
吃与活
当时在干木匠活,没细想,加之好久没亲自做RNA了,脑子也不好用了
吃与活


不是对你不信任,这事即使是悄悄话也不能说,否则就透露身份了。我特地说得很泛泛,没有可以定位的信息。我得罪的人多,透露了很麻烦。

米兰之夜
唉,良心债欠多了,岂不心虚耶?

s
street0120003
okay, I understand