慢病毒transfer质粒上的各个元件问题

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momowo8
楼主 (未名空间)

一直在用一个慢病毒质粒,很好用,想在这个基础上修改下,但是今天看了图谱,有几个问题不太明白,想请教下大家, 我这个慢病毒transfer质粒上的元件顺序是这样的:
RSV Promoter-5’LTR(truncated)-HIV-1(φ)-RRE-cPPT/CTS-EF1a promoter-GFP-
SV40-5'LTR(truncated)-puromycin-WPRE-3'LTR(ΔU3)-SV40 polyA.

我想请教的问题是:
1. 这里有两个读码框,一个是表达GFP的,一个是表达Puro的,SV40 drive的puro的转录终止可以由3'LTR调控,对吧?那么GFP在受到EF1a启动的转录如何终止呢?
2. 为什么会有两个5’LTR? 我看了下序列,第一个5’LTR(RSV挨着的那个)和3'LTR(ΔU3)序列是一样的, SV40之后那个5’LTR,用snapgene自动查询和NCBI blast,也
确实是个5’LTR序列,但是和另外一个5’LTR序列完全不一样,那这个SV40之后的5’
LTR有什么作用?
3. 为什么3'LTR(ΔU3)之后还有一个SV40 polyA? 这个polyA的作用是什么?

谢谢!