如何提高工具病毒感染组织的效率?请支招

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bentian
楼主 (未名空间)
最近有一个很好的想法想要做,但是要求携带目的DNA的病毒能够很好地感染组织,试
过非常多的方法,都无法看到有效的感染。

我试过lentivirus (滴度在10^6),不同种类的AAV(滴度在10^11);试过用强免疫抑
制剂处理小鼠;试过用裸鼠来操作病毒感染,效果均很差(只有<10 细胞被感染。)。="" br="">

病毒需要维持目的基因表达在一两个月左右即可。这个病毒体内感染组织的效率很低使我的课题无法进行。版上若有熟悉这个领域的版友指点一二,定会感激不尽(散尽伪币,尽管知道大家都不用了)。

期待在版友的指导下走过这个瓶颈,谢谢谢谢!
j
jessecai
2 楼
什么组织?
【 在 bentian (朴素的本田) 的大作中提到: 】
最近有一个很好的想法想要做,但是要求携带目的DNA的病毒能够很好地感染组织,试
过非常多的方法,都无法看到有效的感染。
我试过lentivirus (滴度在10^6),不同种类的AAV(滴度在10^11);试过用强免疫抑
制剂处理小鼠;试过用裸鼠来操作病毒感染,效果均很差(只有<10 细胞被感染。)。="" br="">: 病毒需要维持目的基因表达在一两个月左右即可。这个病毒体内感染组织的效率很低使
我的课题无法进行。版上若有熟悉这个领域的版友指点一二,定会感激不尽(散尽伪币
,尽管知道大家都不用了)。
期待在版友的指导下走过这个瓶颈,谢谢谢谢!
b
bentian
3 楼
皮肤
【 在 jessecai (jesse) 的大作中提到: 】
什么组织?
j
jessecai
4 楼
皮肤用lenti很容易感染 不过老鼠的皮肤比较薄 注射有点难度 你的lenti滴度不高啊 没有超离心吧
【 在 bentian (朴素的本田) 的大作中提到: 】
皮肤
b
bentian
5 楼
滴度有1X10^7/ml,经过了10倍浓缩。
能感染上皮不?

【 在 jessecai (jesse) 的大作中提到: 】
皮肤用lenti很容易感染 不过老鼠的皮肤比较薄 注射有点难度 你的lenti滴度不高

没有超离心吧
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luke837
6 楼
你要用病毒的易感组织/细胞才对呀。
非易感组织/细胞是很难被感染的,
嵌入新DNA/RNA 后,病毒的感染力会变弱或丢失的。
vicillibra
7 楼
病毒有效感染组织细胞的前提之一,是该细胞表面有足够的受体表达。
已知某些短肽能够特异性靶向某些组织细胞,因此,可以考虑将该短肽的编码基因和你的目的基因融合到一起(中间用序列隔开)。这种修饰过的病毒,也许会增强感染效率。
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luke837
8 楼
如果实在不行, 你也可使使按普通plasmid处理的方法:

用gene-gun 或 transfection。
j
jessecai
9 楼
你这个滴度还是不高
不知道你感兴趣的是哪种细胞 下面这篇文章用的是intradermal injection
Intradermal Injection of Lentiviral Vectors Corrects Regenerated Human
Dystrophic Epidermolysis Bullosa Skin Tissue in Vivo
【 在 bentian (朴素的本田) 的大作中提到: 】
滴度有1X10^7/ml,经过了10倍浓缩。
能感染上皮不?
j
jessecai
10 楼
挺有意思的 有参考文献吗
【 在 vicillibra (vicillibra) 的大作中提到: 】
病毒有效感染组织细胞的前提之一,是该细胞表面有足够的受体表达。
已知某些短肽能够特异性靶向某些组织细胞,因此,可以考虑将该短肽的编码基因和你
的目的基因融合到一起(中间用序列隔开)。这种修饰过的病毒,也许会增强感染效率
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zhouyangq
11 楼
彧鏈夊崄鐨勫叚娆℃柟鐨勮瘽锛屽嵆渚夸綘鑳芥敞灏100ul鐥呮瘨锛屼篃鎵嶅崄鐨勪簲

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zhouyangq
12 楼
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