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最新回复:2018年4月14日 17点22分 PT
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H
HITer2011
接近 6 年
楼主 (未名空间)
最近想用pSC101质粒,发现有温敏型的质粒pSC101ts,常用于基因编辑后用高温消除
pSC101质粒。
我想了解一下哪些突变造成了温敏型。在温敏型pKD46质粒和原始pSC101比较序列,发
现在ori位置有个NotI位点的插入,是否是造成温敏型的原因。另外,在Rep101有两个
碱基序列不一致的地方(原始质粒的碱基6042 G/A、碱基6137 C/T和Rep101编码区后面的碱基6299 G/C),在pKD46中,CGT编码R257而原始pSC101是CAT编码H257,有文章说
是原始质粒测序有错误,应该是如pKD46质粒中的CGT编码R257 (碱基6042 G/A)。另
外一处是pKD46的Y289(TAT密码子,碱基6137 C/T),而原质粒是H289(CAT密码子)
。有人说这个突变造成pKD46成温敏型的原因。在Rep101之后还有一个点突变,原始质
粒的G突变成温敏型质粒的C (碱基6299 G/C)。
感谢有经验的同学指教。谢谢。
N
Noahgen
接近 6 年
2 楼
好像别的PLASMID也可以用高温CURE。前几天还看到那谁谁说冷冻也可以。
N
Noahgen
接近 6 年
3 楼
能送个pSC101吗?
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最近想用pSC101质粒,发现有温敏型的质粒pSC101ts,常用于基因编辑后用高温消除
pSC101质粒。
我想了解一下哪些突变造成了温敏型。在温敏型pKD46质粒和原始pSC101比较序列,发
现在ori位置有个NotI位点的插入,是否是造成温敏型的原因。另外,在Rep101有两个
碱基序列不一致的地方(原始质粒的碱基6042 G/A、碱基6137 C/T和Rep101编码区后面的碱基6299 G/C),在pKD46中,CGT编码R257而原始pSC101是CAT编码H257,有文章说
是原始质粒测序有错误,应该是如pKD46质粒中的CGT编码R257 (碱基6042 G/A)。另
外一处是pKD46的Y289(TAT密码子,碱基6137 C/T),而原质粒是H289(CAT密码子)
。有人说这个突变造成pKD46成温敏型的原因。在Rep101之后还有一个点突变,原始质
粒的G突变成温敏型质粒的C (碱基6299 G/C)。
感谢有经验的同学指教。谢谢。
好像别的PLASMID也可以用高温CURE。前几天还看到那谁谁说冷冻也可以。
能送个pSC101吗?