===大水车的新水楼===边水边转Coach,Jcrew silk top

我以前纯化过，唯一的区别是以前有0.5%的NP40.

以下是引用兰兰在8/20/2010 5:51:00 PM的发言：
我以前纯化过，唯一的区别是以前有0.5%的NP40.
then add np40
did u check the PI of protein without tag? sometime it's very different after u cut the tag

以下是引用兰兰在8/20/2010 5:50:00 PM的发言：
特别是这次，明明有很多蛋白，最后都杯具了，气s我了。。。。。。。。。。
that's ok, as long as you have a lot of protein, it's very easy to repurify it ah~pat pat, dont  cry~

以下是引用smilehan在8/20/2010 5:53:00 PM的发言：

    
    
     that's ok, as long as you have a lot of protein, it's very easy to repurify it ah~pat pat, dont  cry~
    
谢谢姐姐。。关键是大托大托的蛋白都没有了，只好重新再来了。我在这个地方纠缠了一两个月了，现在才突然醒悟，就是切tag的时候老是沉淀。。。。。

以下是引用smilehan在8/20/2010 5:52:00 PM的发言：

    
    
     then add np40
     did u check the PI of protein without tag? sometime it's very different after u cut the tag
    
好，我打算试一下

以下是引用兰兰在8/20/2010 5:54:00 PM的发言：

谢谢姐姐。。关键是大托大托的蛋白都没有了，只好重新再来了。我在这个地方纠缠了一两个月了，现在才突然醒悟，就是切tag的时候老是沉淀。。。。。
poor baby. check the PI first, if they do change, you need to dialyse the protein when u cut the tag~

以下是引用smilehan在8/20/2010 5:56:00 PM的发言：

    
    
     poor baby. check the PI first, if they do change, you need to dialyse the protein when u cut the tag~
    
好，PI 是用sequence来计算么？

以下是引用兰兰在8/20/2010 6:02:00 PM的发言：

好，PI 是用sequence来计算么？
yes. I believe most websites which calculate the stability and other constances of protein will give u the number.

你们。。。。。在讨论学术诶。。。。。居然不是败家

我去冰箱看有没有东西吃，成天就是馋，555555555

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:08:00 PM的发言：
你们。。。。。在讨论学术诶。。。。。居然不是败家
hahahahaha~~~~~~`admire bah~

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:08:00 PM的发言：
我去冰箱看有没有东西吃，成天就是馋，555555555
haha, ur baby's fault

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:09:00 PM的发言：

    
    
     hahahahaha~~~~~~`admire bah~
    
灰常滴admire哇

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:09:00 PM的发言：

    
    
     haha, ur baby's fault
    
嗯嗯嗯 都属因为她

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:06:00 PM的发言：

    
    
     yes. I believe most websites which calculate the stability and other constances of protein will give u the number.
    
这个我就知道了，我经常用一个软件挺好用的。我去计算一下。谢谢姐姐。。。。。。。。。。

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:08:00 PM的发言：

    
    你们。。。。。在讨论学术诶。。。。。居然不是败家
    
嘻嘻，小白姐姐是专家。。。。。。。。。。

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:08:00 PM的发言：

    
     我去冰箱看有没有东西吃，成天就是馋，555555555
    
你是ddp哇。

以下是引用smilehan在8/20/2010 5:46:00 PM的发言：

    
    
     why? why ikea carry this?
    
好像昨天鲜花上有人说的
ikea不是有个food area卖套餐拉, 点心什么的
好像是那里现在有小龙虾了

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:08:00 PM的发言：

    
    你们。。。。。在讨论学术诶。。。。。居然不是败家
    

 我突然有一点头晕

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 6:14:00 PM的发言：

    
     好像昨天鲜花上有人说的
ikea不是有个food area卖套餐拉, 点心什么的
好像是那里现在有小龙虾了

    
是小龙虾buffet，好像$9.99。。。可惜我zt不感兴趣，不然我这里ikea特别近，我肯定跑去吃了。。。。

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 6:15:00 PM的发言：

    
    

    
hiahia

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 6:16:00 PM的发言：

    
     我突然有一点头晕

    
怀上啦？？

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 6:16:00 PM的发言：

    
     我突然有一点头晕

    
摸摸，咋了？

以下是引用兰兰在8/20/2010 6:13:00 PM的发言：

这个我就知道了，我经常用一个软件挺好用的。我去计算一下。谢谢姐姐。。。。。。。。。。
u are very welcome~

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:19:00 PM的发言：

怀上啦？？

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:18:00 PM的发言：

是小龙虾buffet，好像$9.99。。。可惜我zt不感兴趣，不然我这里ikea特别近，我肯定跑去吃了。。。。
a~I want to check it out~

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:06:00 PM的发言：

yes. I believe most websites which calculate the stability and other constances of protein will give u the number.
膜拜，看不懂

以下是引用兰兰在8/20/2010 5:49:00 PM的发言：
姐姐，我有个蛋白老杯具。
有个tag，需要protease切掉，每次一加protease过夜，第二天就沉淀了。心疼s我了。怎么办呢？

buffer是 50mM Tris ph 7.5, 300mM KCl, (or 300mM NaCl) 10% glycerol, 10mM BME

膜拜，看不懂

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:30:00 pm的发言：

    
    
     a~i want to check it out~
    
http://forums.huaren.us/showtopic.aspx?boardid=331&id=791038&page=4

白白，那个小龙虾就今天有吧。

SOLD OUT!!!
Our "All You Can Eat" Crayfish Party is SOLD OUT! Our restaurant will close at 3:30 today to prepare for our event. The Bistro will be open until 9pm.

lucky me, check the website. that's from the closet ikea~

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:33:00 PM的发言：
白白，那个小龙虾就今天有吧。
yes, just find it out. never mind. I don't want to go there during rush hour. I bet I will stuck on the rd for two hours to get there

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:35:00 PM的发言：

    
     SOLD OUT!!!
Our "All You Can Eat" Crayfish Party is SOLD OUT! Our restaurant will close at 3:30 today to prepare for our event. The Bistro will be open until 9pm.

     lucky me, check the website. that's from the closet ikea~
    
啊这么浩特啊，估计人很多滴～～不去挤也好瓦。我看到顺发有卖活的小龙虾的，自己回家做香辣的吧～～～～口水一下

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:38:00 PM的发言：

嗯呢～～～周五出门好恐怖。可我马上就要出门了，怕怕
bring water with u~mua~

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:38:00 PM的发言：

    
    
     I am too lazy. my zt actually is alergic to this ,haha remembered it just now
    
临关电脑前逛荡一下

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:36:00 PM的发言：

    
    
     yes, just find it out. never mind. I don't want to go there during rush hour. I bet I will stuck on the rd for two hours to get there
    
嗯呢～～～周五出门好恐怖。可我马上就要出门了，怕怕

出门了～～～～～ 楼啃楼啃

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:37:00 PM的发言：

啊这么浩特啊，估计人很多滴～～不去挤也好瓦。我看到顺发有卖活的小龙虾的，自己回家做香辣的吧～～～～口水一下
I am too lazy. my zt actually is alergic to this ,haha remembered it just now

以下是引用smilehan在8/20/2010 6:38:00 PM的发言：

    
    
     bring water with u~mua~
    
YES！！

以下是引用月季猪在8/20/2010 6:19:00 PM的发言：

    
    
     怀上啦？？
    
不是拉, 哈哈
ddp会头晕吗?

JD我朋友，她两年前毕业的护士，她现在的男朋友是医院认识的内科医生~~~
 
 
我也要找医生。。。 如果我有这本事的话。。。

哎，等电话的滋味不好过，在家呆着可就觉得很烦躁。。。

出去散步 啦啦啦啦

 筒子们
那个鸡蛋recall事件!!!!!!!!!!

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 7:07:00 PM的发言：

不是拉, 哈哈
ddp会头晕吗?

会的会的

我上周刚好从costco买了一个package
看了帖子第一层的信息, 去查
哈哈, 很得意, 我的那一盒不在列出来的序列号里

然后..........

幸好我多点了一下最后一页, 看到有人update了两个工厂信息

不幸中招

所以阿.........

大家也回去看看吧

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 7:46:00 PM的发言：
 筒子们
那个鸡蛋recall事件!!!!!!!!!!


我家有farm fresh的， all natural cage free的，好像没啥事

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 7:48:00 PM的发言：
幸好我多点了一下最后一页, 看到有人update了两个工厂信息

不幸中招

达川崎

以下是引用天涯有约在8/20/2010 7:49:00 PM的发言：

    
    
     我家有farm fresh的， all natural cage free的，好像没啥事
    
我在costco买的那种一般的
难道以后要买organic的

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 7:50:00 PM的发言：

    
     我在costco买的那种一般的
难道以后要买organic的

    
摸摸。。。。。。。。。。

我现在买的都是amish 的鸡蛋，organic

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 7:50:00 PM的发言：

我在costco买的那种一般的
难道以后要买organic的

其实也不知道是不是ORGANIC的，但是可能会好点

以下是引用兰兰在8/20/2010 7:51:00 PM的发言：

摸摸。。。。。。。。。。

我现在买的都是amish 的鸡蛋，organic

幸福的人~~~我也要吃AMISH的鸡蛋

以下是引用CrazyDreamer在8/20/2010 7:20:00 PM的发言：

JD我朋友，她两年前毕业的护士，她现在的男朋友是医院认识的内科医生~~~
 
 
我也要找医生。。。 如果我有这本事的话。。。
有的医生很花花

以下是引用未央在8/20/2010 7:42:00 PM的发言：

出去散步 啦啦啦啦
123 321 1233 321

以下是引用天涯有约在8/20/2010 7:54:00 PM的发言：

有的医生很花花
恩。。。 风光个1-2年其实也不错啦

AMISH好瓦
好的
以后我就买这个

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 8:00:00 PM的发言：
AMISH好瓦
好的
以后我就买这个

你那里能买到啊？我不知道在哪能买到

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:04:00 PM的发言：

    
    
     你那里能买到啊？我不知道在哪能买到
    
不知道阿
你不是用这个吗?
我知道costco有另外一种organic的
以后买那个

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 8:08:00 PM的发言：

不知道阿
你不是用这个吗?
我知道costco有另外一种organic的
以后买那个

小兰买的这个~~~我买的事FARM FRESH的

以下是引用兰兰在8/20/2010 7:51:00 PM的发言：

摸摸。。。。。。。。。。

我现在买的都是amish 的鸡蛋，organic

我今天才吃完家里的鸡蛋。沙叫沙门菌啊？煮不死油也见不熟 ？

摘星只率真的粤语比普通话清楚好多哦

以下是引用smilehan在8/20/2010 8:21:00 PM的发言：
摘星只率真的粤语比普通话清楚好多哦
嘻嘻，你开始看了么

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 8:08:00 PM的发言：

不知道阿
你不是用这个吗?
我知道costco有另外一种organic的
以后买那个

我买的是那个。好像不在list里面。就算是那个牌子，不是也分state么，就几个state的有问题了，好像

以下是引用CrazyDreamer在8/20/2010 7:59:00 PM的发言：

恩。。。 风光个1-2年其实也不错啦
哈哈~~~pia你啦

竟然有人转环游世界8号，好像小苹果排了

 对了，谁知道milage的事情怎么回事？

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:25:00 PM的发言：
 对了，谁知道milage的事情怎么回事？

啥东西

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:26:00 PM的发言：

    
    
     啥东西
    
就是攒历程啊。。。。。。

 
以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:25:00 PM的发言：
竟然有人转环游世界8号，好像小苹果排了
我要你的橘花裙

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:26:00 PM的发言：

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:25:00 PM的发言：
竟然有人转环游世界8号，好像小苹果排了
我要你的橘花裙
没收到

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:26:00 PM的发言：

就是攒历程啊。。。。。。
我不懂。。。不是就是攒点数换票么

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:26:00 PM的发言：

    
    
     以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:25:00 PM的发言：
竟然有人转环游世界8号，好像小苹果排了
     我要你的橘花裙
    
我今天穿着出去得瑟了一下。。。。。

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:28:00 PM的发言：

    
    
     我不懂。。。不是就是攒点数换票么
    
是啊，我问小白姐姐吧。。。。。。。

我再也不买nine west 的鞋了，我得几双都不是很舒服，想扔掉又舍不得~~~靴子还成

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:29:00 PM的发言：

    
    我再也不买nine west 的鞋了，我得几双都不是很舒服，想扔掉又舍不得~~~靴子还成
    
9西的鞋子就是不舒服，特别是平底鞋。。。。。。

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:30:00 PM的发言：

9西的鞋子就是不舒服，特别是平底鞋。。。。。。 对，我才知道

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:29:00 PM的发言：
我再也不买nine west 的鞋了，我得几双都不是很舒服，想扔掉又舍不得~~~靴子还成
我现在都买大妈鞋。。。naturelizer

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:32:00 PM的发言：

我现在都买大妈鞋。。。naturelizer
我有个好朋友也特喜欢这个~~~~以后我也买它吧，可素好像不是很好看耶

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:32:00 PM的发言：

    
    
     我现在都买大妈鞋。。。naturelizer
    
很舒服。。。。。。。。

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:34:00 PM的发言：

    
    
     我有个好朋友也特喜欢这个~~~~以后我也买它吧，可素好像不是很好看耶
    
找个好看的。。。。。

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:36:00 PM的发言：

找个好看的。。。。。
我给我妈买过这个牌子的，我还一双都没有呢

以下是引用smilehan在8/20/2010 8:12:00 PM的发言：

    
    
     我今天才吃完家里的鸡蛋。沙叫沙门菌啊？煮不死油也见不熟 ？
    
好像说是做熟了就没有什么问题的

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:34:00 PM的发言：

我有个好朋友也特喜欢这个~~~~以后我也买它吧，可素好像不是很好看耶
有的还好，不算特大妈，肯定没别的Fancy是真的

以下是引用天涯有约在8/20/2010 8:37:00 PM的发言：

    
    
     我给我妈买过这个牌子的，我还一双都没有呢
    
我有一双，还不错，不是很难看。。。。。。

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 8:39:00 PM的发言：

好像说是做熟了就没有什么问题的
对

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:40:00 PM的发言：

我有一双，还不错，不是很难看。。。。。。
我好多双
 
 

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:22:00 PM的发言：
嘻嘻，你开始看了么

ｉｎｇ

以下是引用littlecloud在8/20/2010 8:32:00 PM的发言：
我现在都买大妈鞋。。。naturelizer

这个和ｃｌａｒｋ都很舒服

不过就席买对了也不错，不过没有这两个牌子束缚

以下是引用yiyunyun在8/20/2010 8:39:00 PM的发言：
好像说是做熟了就没有什么问题的

那有啥啊，我们也不吃生鸡蛋

以下是引用smilehan在8/20/2010 8:42:00 PM的发言：

    
    
    

这个和ｃｌａｒｋ都很舒服

不过就席买对了也不错，不过没有这两个牌子束缚
    
born也好。。。。。。。

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:42:00 PM的发言：

born也好。。。。。。。
恩，我也买。不过都是给我妈妈和婆婆，哈哈。

以下是引用smilehan在8/20/2010 8:42:00 PM的发言：

    
    
    

那有啥啊，我们也不吃生鸡蛋
    
哈哈，如果没有煮熟也就杯具。。。。。。

以下是引用smilehan在8/20/2010 8:43:00 PM的发言：

    
    
     恩，我也买。不过都是给我妈妈和婆婆，哈哈。
    
你还从我这里搞了一双大白菜

以下是引用smilehan在8/20/2010 8:42:00 PM的发言：

这个和ｃｌａｒｋ都很舒服 不过就席买对了也不错，不过没有这两个牌子束缚
我的脚喜欢clarks

以下是引用米花町的毛利兰在8/20/2010 8:42:00 PM的发言：

born也好。。。。。。。
我也不知道这个反正以后不买9西德勒

小云，我看不下去摘星只率了～～好多阴谋～